猪传染性胸膜肺炎病原分离鉴定及防治试验

河南某猪场，在育肥猪中，发生了以体温升高、呼吸困难、具有肺炎和胸膜炎典型症状和病变的传染病，笔者进行了病原分离鉴定，并在猪场进行了防治试验，报告如下。

1 材料与方法

1.1 病料来源严重病变的猪肺脏、淋巴结。

1.2 主要培养基特制的牛心浸汁琼脂平板（含10％灭能的马血清及100 μg/ml NAD）、特制的牛心浸汁液体培养基（含10％灭能的马血清及100 μg/ml NAD）、微量生化发酵管等。

1.3 标准金黄色葡萄球菌菌株金黄色葡萄球菌（ATCC25923）购自中国兽医药品监察所。

1.4 细菌的分离培养将病科接种于特制的牛心浸汁琼脂平板，置烛缸内， 37℃培养24h，观察培养结果。

1.5 分离菌株特性检查 (1)取纯培养的菌落，涂片作常规革兰氏染色镜检。(2)在一系列生化培养基中加入NAD，接入浓厚待检菌，37℃培养18 h，观察结果。(3)用不加NAD和马血清的牛心浸汁琼脂平板，将待检物均匀涂布于琼脂面上，用能够产生生长因子的金黄色葡萄球菌ATCC25923菌株培养物划线接种，37℃培养过夜，观察卫星生长现象。(4)在加NAD的牛心浸汁琼脂培养基中加入5％脱纤绵羊血制成平板，接种培养物后经37℃培养18 h，观察溶血情况。(5)将分离菌株制成菌悬液，给3只18～20 g小鼠分别腹腔注射0.3 ml(约含5亿活菌)，另2只腹腔注射生理盐水作对照，观察发病情况1周，并从死亡鼠肝脏分离细菌并鉴定。

1.6 药敏试验将菌落用灭菌生理盐水洗脱，取0.2ml在特制的牛心浸汁琼脂平板上均匀涂布，选用氟苯尼考、强力霉素、恩诺沙星、青霉素、丁胺卡那霉素、环丙沙星、泰乐菌素七种药敏纸片均匀贴在平板上，置37℃培养24 h，观察抑菌环大小。

1.7 疫苗研制 (1)用分离菌种接种于特制的牛心浸汁液体培养基，37℃100 r/min的摇床震荡培养过夜，使菌液的含菌量为5.0×109个/ml，加入0.2％的福尔马林充分混匀，37℃灭活48h，加适量Tween80成水相。(2)将10号白油，Span80、硬脂酸铝按一定比例混合，15磅、30min高压灭菌即为油相，将油相加入高速组织捣碎机，然后缓慢加入一定量的细菌液，乳化5min，分装加塞、压铝盖，并对该油乳剂苗进行无菌检验、安全检验等。

1.8 自家血清制备用已康复的病猪，屠宰时无菌操作采集血清，将血清进行灭活细菌、病毒脱毒处理，并做无菌检验和动物试验。

1.9 防治试验 (1)取发病猪 40头（5日龄），随机分为2组，第1组用氟苯尼考20 mg/kg 体重肌肉注射，1天1次，连用5天，同时在发病时注射自家血清30 ml/头，第2组用氟苯尼考20mg/kg体重肌肉注射，1天1次，连用5天，观察治疗效果1周。(2)取上述发病猪场的15日龄乳猪90头，随机分为3组，第1组为油乳剂灭活苗免疫组，在15日龄时1 ml/头,在35日龄时2ml/头，颈部深部肌肉注射。第2组为药物预防组，25日龄时用氟苯尼考25mg/kg 饲料浓度拌料，连用1周，第3组为空白对照组，对试验猪按常规进行猪瘟、猪链球菌病、猪伪狂犬病免疫，25日龄断奶，并定期消毒，连续观察60天，及时记录各组发病情况和临床表现。

2 结果

2.1 细菌的分离培养见有1～1.5 mm，圆形、中间凸起、边缘整齐、灰白色半透明黏液型菌落。

2.2 形态学检查分离菌株24 h培养物为革兰氏染色阴性，两极着染略深的小球杆菌。

2.3 生化试验结果该分离菌株对葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和果糖发酵产酸，尿素酶试验阳性反应呈粉红色，可在浓厚菌接种后8min出现，随后越来越明显。

2.4 卫星生长现象在ATCC 25923生长线附近生长较好，离线越远生长越差。

2.5 溶血试验该分离菌株为典型的β溶血。

2.6 小鼠致死试验小鼠均在接种后18 h发病，50 h左右死亡1只，从死鼠肝脏中分离到较纯的APP，余者观察结束后全部康复。

2.7 药敏试验结果高度敏感的有氟苯尼考、强力霉素；中度敏感的有丁胺卡那霉素、泰乐菌素；低敏感的有恩诺沙星、环丙沙星、青霉素。

2.8 油乳剂灭活菌研制及自家血清制备该油乳剂灭活苗经无菌检验、安全检验均正常，该自家血清经无菌检验和动物试验均正常。

2.9 防治试验 (1)第1组同时使用氟苯尼考和高免血清治疗，1周后还有1头猪有呼吸道症状，剖检见有肺炎和胸膜炎病变，19头猪痊愈，治愈率为95％，第2组使用氟苯尼考，1周后还有4头猪有呼吸道症状，剖检见有肺炎和胸膜炎病变，16头猪痊愈，治愈率为80％。(2)预防试验：第1组使用疫苗免疫后60天，猪只正常，第2组使用药物预防后，在60天内，共有3头猪出现呼吸道症状，剖检后可见肺炎和胸膜炎病变，发病率为10％；第3组对照，在60天后，共有6头猪出现呼吸道症状，剖检后可见肺炎和胸膜炎病变，发病率为20％。

3 讨论与小结

3.1 该猪场此次发生的传染病，根据流行病学、临床症状、剖检变化结合病原分离、生化试验、卫星生长现象、溶血试验、动物试验确诊为胸膜肺炎放线杆菌感染。

3.2 试验结果表明，猪场发病后，使用自家血清同时配合敏感抗生素，治疗效果良好，在进行免疫预防时，使用自家油乳剂灭活苗预防效果良好，单纯采用抗生素预防和治疗效果均不甚理想。

3.3 该病主要通过空气传播，合理调节饲养密度，搞好猪舍环境卫生，保持良好的通风和适宜的温度，也是预防猪传染性胸膜肺炎发生的重要因素。