猪炭疽病确诊方法

一、临床诊断

猪炭疽的症状和病变只有参考意义，需要实验室检查才能确诊。由于动物组织中的炭疽杆菌暴露空气后形成芽孢，故疑似炭疽的家畜尸体严禁剖检。临床诊断时，对原因不明而死亡或临床上出现痈性肿胀、腹痛、高热、病情发展急剧，死后天然孔流血的病猪，应首先怀疑为炭疽。调查该地区几年来有无炭疽的发生，炭疽死畜的处理情况，发病动物的种类及季节性，炭疽预防注射情况等，为确诊提供依据。

二、细菌学诊断

采取病料时，对可疑炭疽病畜，生前可采取静脉血、水肿液或血便，死后采取末稍血（可切下耳或由四肢末稍采取），也可于左侧季肋部第17-18肋骨间做一垂直切口，采取一小块脾脏，切口应用碘酊棉球塞住。动物在6h以内死亡的，可直接镜检组织和体液。败血型可以在血液中甚至所有组织的涂片中检出炭疽杆菌，局限型可检查局部水肿部位。如动物尸体腐败，炭疽杆菌就会崩解，一般检不出典型炭疽杆菌，而许多厌氧的腐败菌与炭疽杆菌相似，只是这类菌的菌链比炭疽杆菌在组织中形成的菌链更长。

三、动物接种

一般常用小鼠、豚鼠和家兔。将病料或培养物，用生理盐水制成5-10倍乳剂，给小白鼠腹部皮下注射0.2mL，豚鼠皮下注射0.5mL，家兔皮下注射l.OmL，动物通常于12h后注射局部水肿，24 - 36h（小鼠）或2 - 4d（豚鼠、家兔）死于败血症，剖检可见注射部位胶样浸润及脾脏肿大等病理变化。取血液、脏器涂片镜检，当发现有荚膜的竹节状大杆菌时，即可确诊。若接种材料中含有恶性水肿群的细菌通常会使实验动物在炭疽杆菌产生明显作用之前死亡。

四、鉴别诊断

炭疽杆菌与类似菌鉴别还可以用串珠试验，γ噬菌体裂解试验等。

串珠试验：将待检查的肉汤培养物或病料乳剂接种于每毫升含青霉素0.5IU的薄琼脂平板上（琼脂厚度为2mm），然后用灭菌曲玻璃棒均匀涂布后，放37℃恒温箱中3-4h后覆以盖玻片，镜检，若为炭疽杆菌则菌体膨大呈珠状，均匀排列，形成串珠状。

γ噬菌体裂解试验：γ噬菌体是特异性的，只能裂解炭疽杆菌，故可用于炭疽杆菌和类似菌的鉴别。方法是将待检的培养物或病料乳剂涂于普通琼脂平板上使之成圆形，待干燥后用白金耳取一滴1噬菌体，滴加于琼脂面上，放37℃恒温箱中培养3-4h，然后对光观察。如滴加噬菌体部位无细菌生长，周围由于菌的发育而呈轻微的灰白色时，即可确定为炭疽杆菌；而照常生长时为类似菌。

四、血清学诊断

炭疽沉淀反应（Ascoli氏反应）：当病料已经腐败用细菌学诊断得不到可靠结果，以及检查大量畜产品时，可用炭疽沉淀反应。采取病料以肝、脾、肾以及血液为适宜。将被检血液或脏器研磨后，用生理盐水稀释5-10倍，煮沸15-20min，取浸出液用中性石棉滤过，用毛细管吸取透明滤液，徐徐重积于小试管内的沉淀素血清上，于1-5min内如接触面出现清晰的白色沉淀环（白轮），为阳性。荚膜肿胀试验：有荚膜的炭疽杆菌与抗炭疽荚膜血清结合产生抗原一抗体反应，在荚膜表面发生轻微的沉淀反应，使荚膜增厚，镜检时，在炭疽杆菌的周围可以看到折光性强的荚膜。涂有适当稀释（每个视野约10个菌的浓度）的纯培养物的载玻片或感染7- 8h处死的小鼠腹腔液涂片，滴加一滴抗炭疽荚膜血清，混匀，制成湿片，镜下观察，如有大杆菌周围可见边缘清晰、肥厚不等的荚膜，即为阳性。也可用荧光抗体荚膜染色法，方法是将病料涂片，干燥，固定后用炭疽荚膜血清（即用异硫氰酸荧光素标记的提纯的抗炭疽荚膜血清抗体）染色后，用荧光显微镜观察，则炭疽菌的菌体高度膨大，荚膜呈明亮黄绿色荧光。但应注意类属反应问题。

对炭疽芽孢可用炭凝集试验，乳胶凝集试验进行诊断，数分钟之内即可得出结果。

炭凝集试验：玻璃板上滴加被检标本O.lmL（用0.2%氯化钠溶液稀释），然后加入炭疽炭粉血清0.05mL，混匀，静置1-5min，凡出现“++”以上凝集者，即使炭粉一半凝集，且液体较透明者为阳性，该反应可检出每毫升约含78000个以上的炭疽杆菌芽孢标本。

乳胶凝集试验：同一玻板上，分别滴加被检材料2滴，每滴O.lmL，另一侧分别滴加标准炭疽抗原2滴，每滴也为O.lmL，然后再分别往被检材料滴及炭疽标准抗原滴中滴加炭疽乳胶血清及正常乳胶血清各0.05mL，分别混匀，室温下静置，5min内判定结果。当三个对照滴：炭疽乳胶血清加标准炭疽抗原呈“++++"，正常乳胶血清加标准炭疽抗原呈“一”，正常乳胶血清加被检标本呈“一”，出现上述结果，说明反应条件正常，这时炭疽乳胶血清与被检标本滴发生反应者为阳性，不发生反应者为阴性。

除以上所介绍的方法外，协同凝集反应，酶联植物凝集素吸附试验，琼脂扩散沉淀反应，酶标葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)间接染色法等也逐步被应用于炭疽的诊断。