详解病毒样颗粒疫苗在猪病防控中的应用研究 （2）

1.6 猪圆环病毒病

猪圆环病毒2 型（PCV2）是引起仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）为代表的系列疾病的病原，主要侵害6 ～ 12 周龄的仔猪。PCV2 的感染呈世界性分布，已成为危害养猪业健康发展的重要病因之一。尹双辉（2011）首次利用E.coli表达的重组蛋白在体外制备Cap 蛋白VLPs，为研制PCV2 VLPs 疫苗奠定了基础。结果证明体外制备的PCV2 Cap VLPs 疫苗有确实的刺激机体体液免疫和细胞免疫反应的能力。李玲等（2011）应用Bac-to-Bac 杆状病毒/ 昆虫细胞表达系统，获得PCV2b 的重组杆状病毒。将该重组杆状病毒感染HighFiveTM 细胞后， VLPs 在培养上清中的大量存在，为目的蛋白的分离和纯化提供了便利，也为PCV2 基因工程疫苗的产业化奠定了基础。PPV 不仅可引发严重的繁殖障碍性疾病，导致胚胎和胎儿死亡；而且能同PCV2 混合感染，在PMWS 感染中发挥着重要作用。Pan 等（2008）运用PPV VP2 VLPs 作为表位展示载体，在VP2 的N 端插入PCV2 主要T 细胞抗原表位，转染HEK-293 细胞，在腺病毒表达载体中成功表达出嵌合VLPs［PPV ：VLP（PCV2）］；将该带有PCV2 抗原表位的PPV 颗粒在无免疫佐剂参与的情况下免疫小鼠，嵌合的VLPs 不仅能诱导小鼠机体产生PCV2 特异性的CTL 反应，还能刺激小鼠产生高效价的PPV 特异性抗体。朱玲等（2010）选择PPV VP2蛋白的2 个位点插入PCV2 ORF2 蛋白，构建2 个不同的重组体，结果获得期望中的具有良好免疫原性的[PPV VP2 ：PCV2 ORF2] 重组VLPs，同时也揭示PPV VPLs 的N 端1/3 适于外源蛋白插入构建重组VLPs。

1.7 猪蓝耳病

李杨（2012）利用杆状病毒表达系统高效表达了PRRSV GP2b、GP5、M 和N 蛋白，并证实共表达GP5 和M 蛋白可组装成VLPs，而GP2b 有助于VLPs 的释放。

1.8 猪传染性胃肠炎

猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的一种以严重腹泻、呕吐和脱水为临床症状的高度传染性疾病，尤其对2 周龄以内的仔猪具有很高的致死率，死亡率可达100%。该病呈世界性分布，给各国养猪业均造成了严重的经济损失。Baudoux 等（1998）研究表明，体外共表达TGEV 的M、sM 蛋白可形成VLPs，且病毒粒子被释放到细胞培养液中。M 蛋白与sM 蛋白形成的VLPs 能够诱导IFN-α的产生，具有防御TGEV 的感染的作用。冷勇等（2013）、宋振辉等（2014）研究利用家蚕Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统表达了TGEV 的M 蛋白、sM 蛋白和N 蛋白的重组杆状病毒，VLPs 的体外组装试验表明在sf9 细胞内M 蛋白单独表达，M 蛋白和sM 蛋白共表达， M 蛋白和N 蛋白共表达，都可形成VLPs，且VLPs 大小不等。这为进一步研究TGEV 的装配提供理论依据和基础实验材料。

2 存在的问题与展望

VLPs疫苗作为一种新型的基因工程疫苗，其具有强大的免疫优势：表面结构规则，大小合适，不含核酸，不能自主复制，不具有传染性，易于被免疫系统识别并产生很好的免疫效果；在血清中的半衰期较长；质量稳定、安全可靠等等。这极大地吸引了众多疫苗研发者的目光。VLPs 作为免疫原与病毒颗粒一样，在没有佐剂的情况下，低剂量也能激起高效的免疫反应，这将有利于打破肿瘤和病毒慢性感染所产生的免疫耐受，使VLPs 展示表位疫苗具备直接用于治疗的特性。因此，VLPs 作为一种新型疫苗，不仅克服了传统疫苗的不足，而且也弥补了基因疫苗的缺憾，是目前最有发展前景的预防兼治疗的候选疫苗，在肿瘤、传染病、过敏性疾病的预防和治疗上展现了广阔的前景，为科学研究开辟了新的探索领域。然而VLPs 作为预防性疫苗还有很多问题需要探索。如表达系统的选择、VLPs 组装效率的提高以及病毒变异带来的免疫逃避；建立多基因共表达载体的难度大，各个基因表达量的比例难以控制； VLPs 作为疫苗多是几种型特异性多价疫苗，而多价苗之间的量效关系确定较为复杂；有的VLPs必需在添加佐剂后才能达到免疫效果，而佐剂和VLPs 的剂量比例关系需要进一步验证；VLPs 作为疫苗的最佳免疫途径、剂量和保护作用的确切评价还无定论；VLPs 疫苗的免疫效果与全病毒疫苗（灭活苗或弱毒苗）接近，但在交叉免疫方面仍然存在缺陷等等。虽然VLPs 疫苗存在诸多不足，但是基于VLPs 构建多价或嵌合疫苗具有广阔的前景，相信随着以上问题的逐步解决，更多VLPs 疫苗的成功问世指日可待。