公猪精液质量评估（二）

5.精子的浓度(或密度)

精子的浓度是指单位体积精液所含的总精子数。

(1)血球计数板法浓度测定

精子的浓度可用血球计数板法进行测定：轻轻摇动精液，用微量移液器(取样器)取精液100微升，擦去外部精液，加入一次性试管中，用移液管吸取3%氯化钠溶液3.9毫升(即3900微升)加入精液中，混合均匀，原精液被稀释了40倍。

将血球计数板放在载物台上，加盖盖玻片，用取样器吸取25微升稀释后精液加入计数板与盖玻片之间的计算室中使计算室充满。放在显微镜下找到计算室，计数计算室内的总精子数，为了减少计数的工作量，可选择有代表性的五个中方格，如四角一中心，或斜对角线的五个方格，用红色框标记的中方格)计数精子。

为了避免计数精子时重复，应以精子的头数为准，对在格线上的精子，可依照数上不数下，数左不数右的原则，计数五个中方格中的总精子数。为计算室的一个中方格，在计数量，在右侧线和下端上的精子(为了识别，标记为白色)是不应进行计数的精子。

五个中方格总精子计数完后得出的结果，依下列公式进行计算原精子密度(此公式已被简化)：

精子密度(亿个/毫升)=五个中方格总精子数×0.02

血球计数板法是其它光学测定方法的基础，因为光学的度数是根据光学仪器的原理得出的，与精子密度并没有直接关系，必须有已知的密度值才能获得对照表。

(2)分光光度计或精子密度计法

这种方法是采用光学仪器，根据精子浓度越高，透光率越低的原理进行精子浓度测定的。在440纳米可见光下，用加柠檬酸钠溶液的比色杯，按100%透过率作空白对照，然后在另一比色杯中加入等量的柠檬酸钠溶液，再加定量精液，混合均匀后，放入样本池，读出透光率读数。最后查精子密度查对表，查出精子浓度读数。有时提供的对照表是指稀释后精液的精子浓度，需根据稀释倍数，换算出原精液精子浓度。精子密度查对表是用先用血球计数板测出诺干个精液标准样本的精子浓度值，然后将其稀释成不同浓度梯度的样本，每个样本的精子浓度均可计算出，测出其透光率，然后制成透光率和精子浓度查对表。

(3)精子密度杯法

由郑州牧业工程高等专科学校张长兴老师发明的精子密度杯，可以很方便地进行猪精子密度的测定，而且设备简单，价格低廉。

将10毫升生理盐水加入精子密度杯，根据采集到精液的色泽，初步判断精子浓度的高低，可选择添加原精液0.5毫升、1毫升、2毫升任一个添加量，加入生理盐水中，对初学者来说，可不必选择原精液添加量，只需固定地添加1毫升量即可，只是测定值的精确度略低。用拇指压紧杯口，上下翻转4～5次，然后在自然光或较强的光照下，将密度杯与眼呈水平，从上向下观察其读数值，再根据实际添加量，查对照表的相应的列，就可以查到原精液的精子浓度值。

6.精子的形态观察

精子的形态观察主要是观察精子的畸形率，猪的精子畸形率不能超过20%，否则就必须废弃。

7.精子的凝集现象

与牛羊不同的是，猪的精子很容易发生凝集。当凝集严重时，精液在直观条件下就可看到精液很不均匀。轻度凝集，可在显微镜下观察到，精子成团存在，有些精子尽管在蠕动，但已经失去了前进运动的能力。精子凝集后，凝集的精子失去了活力，使精子活力总体上大幅度下降。因此，凡有轻度凝集的精液，如果活力符合要求，应注意作好记录，并在精液稀释后12小时进行活力检查，如果活力下降很明显，应考虑将精液废弃。活力0.7以上，有少量凝集，可用一个+号表示，有明显的成团精子凝集可用++表示，有大团凝集者为+++。有成团凝集的精液应废弃。

精子凝集成团，分布不均

取样稀释原精液

将稀释后的精液注入计数室中

一个中方格的精子(白色为不计数精子)

抹片与染色