鸡传染性支气管炎病的诊断鉴别方法

根据流行病学、临诊症状、剖检以及应用多种抗菌药物无明显疗效，可以作出鸡传染性支气管炎的初步诊断，但要确诊还必须分离到IBV和进行鉴定。以下程序经实践证明是较实用的。采集气管、肺、肾等病料制成悬液，经抗菌药物处理后接种9～10日龄鸡胚尿囊腔，隔48h将胚置于4℃冷死，收获尿囊液。选择 NDV凝集反应阴性的尿囊液肓传3～5代，待出现典型的侏儒胚变化并进行鸡胚内干扰NDV试验。这种试验较简单：将可疑为IBV的尿囊液接种9～10日龄鸡胚，10h后再接种NDVB1弱毒，又过了36h(共46h)便收集尿囊液检测其对鸡红细胞的凝集作用(HA)并与只接种NDV—B1株的尿囊液的HA 滴价比较。如果前者HA滴价<20，而后者>40，则可认为有干扰作用，分离物差不多可以确定为IBV(辛朝安，1982)。有时原始病料混进NDV，此时可用NDV抗血清进行感作处理再接种鸡胚以达到提纯IBV的目的(艾国光等，1980、1982)。获得分离物后应作病的人工复制。通过喉头开口向11～28日龄幼鸡气管内注射0.2ml含毒胚液，一般24～48h内就会出现典型的呼吸器官症状。有人跟踪通过鼻滴入的带颜色的液体发现是经吞咽动作入消化道，因而认为滴鼻感染的鸡其气管刮取物中的病毒是感染后繁殖的病毒而非起初滴入的病毒，故滴鼻感染再从气管回收病毒是较合理的程序。

进一步的IBV鉴定，除了抗脂溶剂、耐温、耐酸碱等理化检验以及核酸型鉴定和电镜观察外，各种血清学方法较为常用。它们亦可用于疾病调查，其中值得提一提的有以下数种。

1.中和试验 这是利用标准的阳性血清与被检病毒混和后接种鸡胚、鸡胚气管器官培养物或CEK细胞培养物等进行的。前两种宿主系统适用于刚分离的野毒，CEK系统却要求经多次传代在CEK能产生CPE的适应病毒株。中和试验特异性高，可以鉴定血清型，取材也比较容易，但取结果需几天时间。

2.间接血凝试验 用已知IBV标准株致敏经戊二醛和鞣酸处理的兔红细胞，可以制备检测抗体的抗原。本试验有高度敏感性和特异性，可检出100%感染鸡，抗体效价可达512倍，感染后60天抗体价不见下降。可以与新城疫(ND)、马立克氏病(ND)、传染性喉气管炎(ILT)等多种鸡传染病的阳性血清进行鉴别。用被检病毒注射鸡制备抗血清进行间接血凝可以确定是否与红细胞上的IBV同一个血清型。本试验操作简单，出结果快。有两种操作法：白瓷板法用未经稀释的血清在20～25℃温度条件下，2min就可判定结果;微量板法对血清作二倍系列稀释，在室温2h可判定(王锡坤等，1984)。

3.琼脂凝胶沉淀试验(AGPT) 这种通常简称琼扩的试验，用于IB多作检抗体用(冠玫霞等，1991)。当用于检抗原，须用鸡制备标准IB高免血清;被检抗原则是气管刮取物。感染后 12h便呈阳性结果，以第3、4天比例高一些，可持续1周。本法特异性强，可与ILT、ND、FP区别(黄国模，1984)。有人用条件为电压 4--6V、电流4～5mA、时间1.5h，在巴比妥缓冲液制备的琼脂板进行对流电泳，发现发病第2天无沉淀线而3周后才出现(胡仁山等，1984)。

4.酶联免疫吸附试验(ELISA) 利用密度梯度离心法提纯IBV抗原包被微量板，依次加入被检鸡血清、兔抗鸡IgG酶标记物、底物、终止液等。有人发现ELISA比AGPT和血清中和试验 (SN)检出的抗体高峰早得多，分别为感染后的第11、14、28天，持续期也较长，分别为98、56、56天。作者认为ELISA有较强的群特异性，不同毒株之间有交叉反应，而在HI试验和荧光抗体试验(FAT)中，不同血清型之间交叉不明显。