精液保护剂对稀释精液保存质量的影响

曹建国1许栋2张和军3

种公猪精液在采集、稀释液配制和精液稀释过程中，会因外界环境或操作疏忽而使精液或稀释液受到某些病原微生物的污染，影响稀释精液的质量和保存时间。靓精为一种精液净化保护剂，含5% 聚维酮碘，能抑制或杀灭病原微生物，减少病原微生物对精子质量的影响，提高精子活力，延长保存时间。本试验在公猪精液中加入靓精，通过检测稀释精液在保存期间的精子活力和精子畸形率，观察靓精对稀释精液保存质量的影响。

1 材料和方法

1.1 精液和药物

    1.1.1 精液：采自上海祥欣畜禽有限公司种公猪站的3头杜洛克生产公猪，耳号分别为D119903、D18209、D59401。

    1.1.2精液稀释液：全能健Z（商品名），猪精液稀释保存剂，日本全能工业株式会社提供技术（中牧南京动物药业有限公司生产，生产批号14043515）。

    1.1.3 靓精（商品名）：成都美强兽医技术服务有限公司提供（四川省川龙动物药业有限公司生产，生产批号20130401）。

1.2 主要仪器设备

密度仪SDM1、双目显微镜SDE6500、电子天平、半自动包装机、恒温冰箱、伟力彩色猪精子分析系统。

1.3 精液处理方法

同一公猪精液分为靓精处理组和常规处理组两个处理组，每个处理5个重复。靓精组在精液稀释剂中按比例加入靓精产品，常规组不加入。精液稀释剂需提前24h配制好。采精后进行精液密度检测，将新鲜精液与精液稀释剂按0.5亿/ml的标准进行稀释，分包后静置30min，防震保温气泡膜逐袋包裹置于泡沫保温箱中，内置300ml冰袋，使温度保持在17℃左右，由专业物流公司送实验室检测。

2 测试结果

2.1 精子活力

用移液器取精液4µl置于精子计数板上，并加盖专用玻片。每个样品观察3个视野，并记录检测值。连续观察5天。

经检测，靓精处理后的精液，在恒温17℃冰箱保存条件下的精液，第1天精子活力84.58%、第2天78.75%、第3天76.25%、第4天66.25%、第5天63.33%；常规组精液，第1天精子活力80.00%、第2天73.75%、第3天70.00%、第4天59.58%、第5天53.33%（见图1），结果表明靓精组的精子活力优于常规组，说明添加靓精能延长稀释精液的保存时间。

图1  连续保存天数的精子活力变化

2.2 精子畸形率

精子畸形率的检测步骤为：

    2.2.1 抹片：将样品均匀地涂布于载玻片上，每样品制作两个抹片；

    2.2.2 固定：在已风干的抹片上滴1.0ml-2.0ml中性福尔马林固定液，固定15min后用水冲去固定液，吹干或自然风干；

    2.2.3 染色：姬姆萨染色1.5h后用水冲去染液，晾干待检；

    2.2.4 镜检：将制备好的抹片在显微镜下观察，每个抹片观察200个以上的精子（分左右两个区），取两片的平均值。

测试结果显示，靓精组精子畸形率第1天6.53%、第2天8.39%、第3天8.44%、第4天8.88%、第5天9.33%，保存5天期间共上升2.8个百分点，平均每天上升0.56个百分点；常规组精子畸形率第1天6.22%、第2天8.66%、第3天9.27%、第4天9.27%、第5天10.21%，保存5天期间共上升3.99个百分点，平均每天上升0.8个百分点（见图2）。结果表明，靓精组的精子畸形率低于常规组，添加靓精能降低精子畸形率。

图2  连续保存天数的精子畸形率变化

3 讨论与小结

3.1 靓精组能保持较长时间的有效精子活力，延长稀释精液的保存时间。相比较，靓精组从保存第1天后至第5天，精子活力分别比常规组提高5.73%、6.78%、8.93%、11.19%和18.75%，差异显著（P<0.05）。结果显示，靓精组在第5天精子活力仍达63.33%，而常规组在第4天已低于60%，不能用作配种用。因此，在恒温17℃冰箱保存条件下，猪精液中添加靓精，保存时间可从3天延长到5天，为应用人工授精的猪场提供了延长保存时间的新途经。

3.2 靓精组能降低精子畸形率，提高精子的保存质量。相比较，靓精组除第1天精子畸形率高于常规组4.91%，从保存第2天后至第5天间，精子畸形率分别比常规组降低5.73%、6.78%、8.93%和11.19%；保存5天间靓精组精子畸形率比常规组平均降低5.88%，显示公猪精液中添加靓精能降低精子畸形率，从而更有效地保护精子。

综合来看，在种猪精液日常生产中，应用“靓精”精液净化保护剂，不失为一种延长精液保存时间和保护精液质量的新方法。

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